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鼠抗人白細胞特異性單克隆抗體操作步驟:

1 . 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步后進行

⒉ 緩沖液洗  3min/2  次。

⒊ 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分鐘。

⒋ 緩沖液洗  5min/2  次。

⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室溫下孵育  5  分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過  10  分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有  5  -  10%  正常羊血清,這一步可以省略。)

⒍ 緩沖液洗  5min/2  次。

⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)

⒏ 緩沖液洗  5min/2  次。

9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增強子),在室溫下孵育  20  分鐘。

10  .緩沖液洗  5min/2  次。

11  .滴加  HRP Polymer (酶標二抗) ,在室溫下孵育  30  分鐘。

(注: HRP Polymer  對光敏感,應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)

12  .緩沖液洗  5min/2  次。

13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混勻后滴加到切片上,孵育  3  -  15  分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)

14  .自來水充分沖洗,復染 ,脫水,透明,封片。