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對(duì)于Elisa試劑盒的操作你做的正確嗎?看這里!
點(diǎn)擊次數(shù):770 更新時(shí)間:2020-06-27
  Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。Elisa試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。
 
  Elisa試劑盒的操作方法:
 
  雙抗體夾心法
 
  .包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為~0μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。
 
  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
 
  3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.ml。37℃ 孵育0.5~小時(shí),洗滌。
 
  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.ml,37℃ 0~30分鐘。
 
  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或較淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則40nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.倍,即為陽(yáng)性。
 
  間接法
 
  .用包被緩沖液將已知抗原稀釋至~0μg/ml,每孔加0.ml,4℃過(guò)夜;
 
  2.次日洗滌3次;
 
  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育小時(shí),洗滌;
 
  4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)二抗體(抗抗體)0.ml;
 
  5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
 
  6.’用DDW洗滌。
 
  其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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